细胞培养板的选择

    细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。
     

      （一）平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择：
贴壁细胞一般用平底培养板。悬浮型细胞的培养一般用V型。
U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。
不 同型狀的板子自然有不同用途。平底的什麼類型的細胞都可用﹐但當細胞數目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁和懸浮細 胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面﹐當做兩種不同淋巴細胞混合培養時﹐需要二者相互接觸以刺激﹐因此﹐一 般需要U型板﹐因細胞會由於重力的作用而聚集在一個很小的範圍內。V型板的用途更少﹐一般用于細胞殺傷實驗時﹐為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但 這種試驗也可用U型板替代(加入細胞後﹐低速離心)如果是養細胞的話， 通常是選用平底的， 另外要特別注意材質， 標示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養細胞用的。
圓底的好像沒聽說過拿來養細胞。 圓底的通常是拿來做分析， 化學反應， 或是保存樣品用的， 因為圓底比較好將液體吸得乾淨， 如果用平底的就不好吸了。 不過， 如果你是要測吸光值的話， 一定要買平底的才行。
 
     

      （二）问题集锦
问：我看到培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ，但不知道到底什么实验用哪种规格，请指教。
答：要根据你具体的实验要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，细胞爬片一般用24孔等！要具体根据你实验来定！
问：请问哪位高手知道Terasaki板是什么培养板，与普通细胞培养板有什么区别？谢谢！！
答：Terasaki plate主要是用于晶体学研究，产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法，两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ，特殊的材料有利观察晶体结构。
细胞培养板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料，同时还有low binding surface，有关更多实验材料上的应用与对材料的选择。
问：我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗？请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别？
答：用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉，我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。
区 别：酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，但也可以用来测蛋白浓度；酶标板包括包被板和反应板，一般不能用做细胞培养，它主要做免疫酶联反 应后的蛋白检测，它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子：见网站
常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
培养器皿       面积（cm2）培养液量（ml）  细胞量
96 孔培养板       0.32          0.1        10e5
24孔培养板         2            1.0      5×10e5
12孔培养板        4.5           2.0        10e6
6孔培养板         9.6           2.5      2.5×10e6
3.5 cm 培养皿      8            3.0      2×10e6
6 cm 培养皿       21            5.0      5.2×10e6
10 cm 培养皿      55           10.0     13.7×10e6
25cm2 培养瓶      25            5.0       5×10e6
75cm2 培养瓶      75          15～30      2×10e7
   

    (1)细胞培养板的密闭和污染问题：
细胞培养板的加样和操作：细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则，各项操作要保证规范、科学，不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。
问：96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢？
答：1.盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气（实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值）。
2. 凡事有利必有弊，这样当然增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的 a培养箱内空气必须清洁（定期紫外线照，酒精擦洗，尽量少开关培养箱）b培养箱内的湿度必须始终保持为100%（培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽）。
就好像培养皿，也是一个盖倒扣的容器，也不会污染。主要是因为盖子“L”型边缘产生气流负压的缘故，灰尘上面才附着有微生物，而气流携带的灰尘是无法通过产生负压的盖边缘的。而透气作用只是通过空气的扩散，不会产生气流，所以只会透气不会透菌。 
   

    (2)细胞分布不均及解决办法：
问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊？我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊？
答：请问你的细胞是如何混匀的？是滴管吹打还是振荡培养板？如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多！自己可是试试！
周边一般是相对会多一点，但是中间的数量也不会很少啊~~ 铺板的时候我也没有特异去振荡培养板。
大概是板子的质量问题吧或者是不是铺板时候的细胞密度太低了？我用的corning的板 。
一个好办法：在你培养种板之前，把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出，种入细胞时力量要轻，可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中，培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡，否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。
我今天把培养板放入培养箱里几个小时，适当的把细胞密度加大了一下，另外多加了一点培养液，今晚看细胞铺的挺好的。
我认为有两种可能解决你问题的办法:
1.加入前吹打均匀;
2.从多孔板侧边或底边缓慢加入。
我在做原代培养时也遇到过这种情况，我一直以为培养皿铺胶不均匀会导致这种现象，因为混匀的血管段加入到培养皿中时，在相差显微镜下血管段均匀分布在培养皿中，24h后贴壁的血管段就是周边多，中间相对少些。

    (3)6孔板接种和换液：
问：我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里（不管加药和对照），总有两三个孔（随机）细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗？到底是啥原因呢？请各位指点
答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。
另外，跟你细胞的生长状态也有关。加药之前的细胞可以用高点的血清浓度培养。保证细胞状态良好。
或者放在37度水浴锅里孵育也可以，或者是培养板本身的问题，你再换换其他培养板试试看。再有可能就是细胞状态问题了，种板时的血清浓度调高试一下
问： 最近几天，我用六孔培养板接种细胞，培养24小时后更换培养基，在更换培养基之前，显微镜观察到细胞贴壁，状态非常的好，更换了培养基后，立即用显微镜观 察，发现每个孔中都近乎有一半的细胞表现出近乎死亡的状态。细胞变得非常小，产生大量的碎片，而另一半的细胞一切正常，异常细胞与正常细胞之间存在一条分 水岭，上半个圆是好的，下半个圆就不好，这是怎么一回事？
答：你可以看一下是不是培养板没放水平。有一回我也出现过这种情况。
你的培养液如何，如果培养液过期，细胞就不会贴壁。换一点新配制的培养液试一试。
我也经常碰到，我想可能是板的问题，换一个牌子的板或换用培养瓶就没问题了。
不知楼主所需换液的培养板多不多，换培养基的时候如果没有注意风机的影响，特别是所需换液的培养板很多时，容易使细胞因风吹失水而干缩破裂。如果如此，换液时应该逐个培养板进行，别怕浪费吸管，注意操作的效率！

         （三）方法讨论
    细胞培养板常用来进行不同的处理效应观察，有些检测可能直接就在培养板中进行，这里面有些什么样的经验或小窍门呢？
1．细胞培养与MTT
问:做MTT时，96孔培养板细胞浓度该是多少？
答:我觉得细胞的浓度并不需要那么精确，关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平。
比如我做MTT，起初用的细胞浓度为5000/ml，每孔100ul，培养3天观察，发现细胞数太少，各孔OD值反面难于比较。后来我换用10000/ml，结果就很好。
当然细胞数也不能太多，这其实取决于你细胞的生长速度，生长快的细胞，可接种浓度低点。这主要是使细胞增殖率不致受处理因素之外的其他因素影响，比如接触抑制，营养竞争。
总之，做MTT时细胞数应较低，目的就是为了排除其他因素的影响，以使每孔细胞生长情况尽可能地反映出处理因素的影响。
2．细胞培养板与免疫组化
问：在塑料的细胞培养板上，进行免疫组化应当怎样合适，有没有这样的技巧？
答：完全没有什么特别的，只是在最后封片的时候，有些不同。还有需要注意的是每一步加液体时应从培养孔的壁上轻轻加上。使液体慢慢到达孔底，我第一次作时，没注意到这一点，到最后细胞所剩无几，所以虽是细节问题，但很重要 。