Western blot 实验技术服务

一．    Western blot的实验原理
Western Blot中文名称是“蛋白质免疫印迹”，它是将电泳分离技术与抗原抗体特异性结合的特点相结合的一种实验方法。通过将蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，之后经过一抗孵育，酶标二抗孵育，化学发光显色或者放射性自显影等显色方法来检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
二．服务优势
1.严格规范的SOP，确保实验过程准确完成；
2.专业的Image J统计分析软件计算灰度值；
3.真实的原始图像和分析结果。
三．Western blot检测样本类型
1. 细胞培养上清液（胞外）；
2．细胞和组织裂解液。
四．样本处理方法
1. 细胞样本处理
1.1每2毫升细胞裂解液加四分之一片蛋白溶解酶抑制剂片剂，置于4℃冰上；
1.2取出六孔板（含有培养细胞），去培养基，PBS冲洗，每孔加入60-100微升细胞裂解液（已加入蛋白溶解酶抑制剂），吹打，用细胞刮将贴壁细胞刮下，用移液枪吸到已标记的EP管中，置于4℃冰上。
1.3 超声充分裂解细胞后，4℃、12000r离心10min，取上清，快速加入到已标记的EP管中。分装后于-80℃。
2. 组织样本处理
2.1 称取新鲜组织100mg左右，按照250mg组织加入1ml裂解液（含PMSF），加入到每管中；
2.2 将含有裂解液的组织用干净镊子或小剪刀剪碎，越碎越好（冰上操作）；
2.3 使用组织匀浆器裂解含有裂解液的组织（4℃冰上操作）；
2.4 充分裂解之后，4℃、12000r离心10min，取上清，快速加入到已标记的EP管中。
3. 蛋白定量
注意：所有样本收集后应及时分装并贮存于-80℃，避免样本反复冻融。
五．Western blot实验流程
样本制备→SDS-PAGE电泳→转膜→封闭→一抗孵育→二抗孵育→显色→分析
六．样本寄送说明
1.样本务必要在干冰中运输，根据运输时间放足够量干冰，避免样本暴露于常温状态；
2.寄送的样本中，务必加放上纸条，写明客户、单位、种属和指标等相关信息。